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                  突破传统细胞制备工艺,宾大研究团队一日生产出CAR-T细胞

                  医麦客2019年11月13日 10:24 点击:1485

                  CAR-TXIBAOLIAOFADECHUXIANSHIYIXUESHISHANGYIGEJUDADECHUANGXIN,JIUZHULEWUSHURENDESHENGMING,BINGWEIXUDUOJIBINGDEZHIYUTIGONGLEKENENG,SHIMUQIANZHONGLIUZHILIAOLINGYUZUIJUQIANJINGDEFAZHANFANGXIANGZHIYI。DANSHIGAOEDECHENGBENHEGAODUKEBIANDEZHIZAOGUOCHENGSHIQINENGFOUGUANGFANTUIGUANGDEGUANJIAN,YINCICAR-TXIBAODESHENGCHANGONGYISHOUDAOLEJIDADEGUANZHU。

                  重磅:突破传统细胞制备工艺,宾大研究团队一日生产出CAR-T细胞


                  ▲ 图片来源:ash.confex

                  近日,一个宾大的研究团队在美国血液学学会(ASH)会议公布了一份研究摘要,宣布其可在短短24小时内产生功能性CD19特异性CAR-T细胞(CART19)。这是继亘喜生物宣布将 CAR-T 制造时间从两周缩短至一天后的又一技术革新。

                  传统CAR-T细胞制造方法

                  ZAIMUQIANDEXIBAOZHILIAOKAIFAGUOCHENGZHONG,JINGUANCAR-TXIBAODESHENGCHANTONGGUOGEZHONGZHIZAOFANGFAJINXING,DANSUOYOUZHIZAOFANGFADOUBAOKUOXIANGTONGDEGONGTONGBUZHOU。

                  首先,通过白细胞分离术分离患者的白细胞(WBC)并洗涤。然后,激活T细胞用CAR转基因转导扩增至所需的细胞数量用于治疗,制剂生产和灌装。在对患者进行质量控制测试和预备性淋巴清除化学疗法后,将产品注射到患者体内。

                  重磅:突破传统细胞制备工艺,宾大研究团队一日生产出CAR-T细胞


                  ▲ CAR-T细胞制造过程的流程图(图片来源:discovery.ucl.ac.uk)

                  • 白细胞分离术和细胞洗涤决胜棋牌。T细胞疗法开始于通过白细胞分离法获得患者的WBC,这是一种将白细胞与全血分离的单采血液成分术。通常采用连续或者半连续的密度梯度离心方法。在分离过程中添加的抗凝剂,红细胞和血小板在洗涤过程中会被清除。抗凝剂在活化的过程中能够改变细胞的特征,红细胞会影响产品的临床效果,血小板会导致细胞的聚集。洗涤后,直接使用WBCs或者WBCs经程序降温冷冻保存。

                  • 富集和细胞决胜棋牌。一些研究人员使用CliniMACS系统对细胞进行富集和洗涤,其中相应的抗体与顺磁珠连接。FredHutchinson Cancer研究中心和西雅图儿童医院为CD4+(辅助性T细胞)和CD8+细胞(细胞毒T细胞)富集WBC,以便输入具有确定的CD8+/CD4+细胞比例的产品。类似的,Brown等富集收集CD62L+细胞。MDAnderson癌症中心发现NK细胞会阻碍T细胞的培养。当NK细胞超过10%时,使用CD56+磁珠可以去除NK细胞。拉莫斯等人在具有> 95%循环白血病细胞的两名患者中进行CD3 +选择,以使得能够从含有低百分比的T细胞的单采血液成分产物中扩增。

                  • 活化。在体内,通过抗原呈递细胞,例如树突细胞(DC)刺激天然T细胞的增殖和分化。T细胞通过T细胞受体(TCR)与位于DC细胞表面的主要组织相容性复合物之间的相互作用以及通过共刺激分子(如CD28,4-1BB和OX40)激活。为了避免与DC共培养繁琐的过程,已经开发并实施了几种模拟T细胞天然刺激的方法。最基本的方法是加入OKT3(抗CD3单克隆抗体)和白细胞介素。

                  • 基因递送。基因递送可以分为病毒和非病毒的方法。在CAR-T细胞治疗中,包括电转DNA,转座子系统以及病毒载体,尤其是慢病毒或逆转录病毒转染。病毒转导是最常见的基因递送方法。

                  • 扩增。在目前的细胞培养过程中,通常增加培养基体积;通常通过增加袋子或烧瓶的尺寸或通过从板到烧瓶,烧瓶到静态培养袋或静态培养袋换成RM生物反应器。

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                  ▲ 图片来源:discovery.ucl.ac.uk

                  一天内生产CAR-T细胞

                  CAR-T细胞疗法的疗效取决于过继转移后T细胞的植入和持久性。植入和持久性的潜力与T细胞分化的状态有关,宾大团队此前已经证明减少离体培养的持续时间将限制T细胞分化并提高CAR-T细胞疗法的疗效。但是大多数实验方案通常先通过TCR和共刺激受体的结合激活T细胞,然后将T细胞离体扩增9到14天,这对于CAR-T细胞疗法的疗效产生了一定的影响。

                  于近期发表在ASH年会上的研究摘要,宾大团队描述了使用慢病毒载体可在一天内产生功能性CD19特异性CAR-T细胞(CART19),而无需事先激活T细胞,。该摘要显示了使用非优化过程,可以使用表达红外红色荧光蛋白(iRFP)的慢病毒载体转导平均6.5%(范围为2%-10%)的新鲜分离的静态T细胞,与活化的T细胞转导相比,表达动力学更慢(静态和活化T细胞分别在96小时和48小时达到峰值)。尽管与活化的T细胞相比效率低得多,但在所有T细胞亚群中检测,其中央记忆T细胞显示出最大的转导效率;与未处理的T细胞相比,平均转导率高4倍。

                  宾大团队证明了即使没有逆转录或整合酶功能,CAR表达也可以在静态的T细胞中发生,即所谓的“伪转导”。重要的是,宾大团队证明了该表达产生的CAR-T细胞具有溶细胞活性和效应细胞因子,对抗原的反应类似于激活和转导的CAR-T细胞

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                  ▲ 图片来源:ash.confex

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                  ▲Michael Milone( 图片来源:med.upenn)

                  国内相关进展

                  此前,免疫细胞疗法公司亘喜生物科技集团有限公司(“亘喜生物”)宣布成功开发了新型FasT CAR-T 生产平台,该技术可将CAR-T制造时间从两周缩短至一天。同时,体内和体外研究显示,CD19靶向 FasT CAR-T (“CD19-F-CAR-T") 对B细胞急性淋巴细胞白血病 (B-ALL) 和非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 均具有更高的疗效。

                  YUCHUANTONGCAR-TLIAOFA (C-CAR-T)XIANGBI,FasT CAR-TDADASUODUANLEZHIZAOSHIJIAN,JIANGDILEZHIZAOCHENGBEN。FasT CAR-TZHIXUYAO1TIANDESHENGCHANSHIJIAN(DANYINGJIANGUANYAOQIU,ZHILIANGFANGXINGJIANCEXUYAO7TIANSHIJIAN),ERC-CAR-TSHENGCHANYIBANXUYAODAYUELIANGZHOUSHIJIAN,ZAIJIASHANG7TIANDEJIANCESHIJIAN,YINCI,FasT CAR-TKEYITIQIANYUE12TIANDESHIJIANHUISHUJIHUANZHE。ZHEIDUIYUBINGQINGJINZHANXUNSUDEHUANZHELAISHUOSHIZHIGUANZHONGYAODE。

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                  结语

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                  该研究团队将于12月9日的ASH会议上公布更多的数据,而我们期待着更多令人激动的数据。


                  CANKAOLAIYUAN:

                  1.http://ash.confex.com/ash/2019/webprogram/Paper131147.html

                  2.http://discovery.ucl.ac.uk/id/eprint/10050033/1/Veraitch_20180109_CAR%20T%20cell%20manufacturing%20Review%20-%20Revision.pdf

                  3.http://www.med.upenn.edu/cci/milonelab/

                  4.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30030295


                  (来源: 医麦客 )


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